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q 【Trans 實驗常見問題和解答】Western Blot -- 封閉液的選擇

a WB用的最適封閉液往往具有係統依賴性。決定合適的封閉液可能增加係 統的信號信噪比。有時,從一個底物轉換到另一個底物時,所用的封閉液會使信號減 少或增加背景。對係統進行不同封閉液的嚐試可能達到最好的結果。避免使用牛奶做封閉試劑,依賴其抗生素蛋白,因為牛奶含有很多生物素。盡管超級封閉液會有 很好的效果,但我們還是建議在一個特定係統中嚐試用幾種封閉試劑,因為沒有一種最優封閉試劑適合所有係統。

q 【Trans 實驗常見問題和解答】蛋白質電泳 -- 蛋白質Marker遷移率不準

a 和其他公司校正過,相對來說很準確,如老師需要給老師提供和其他公司比較圖;
不同來源的蛋白自身結構會影響遷移率,marker提供一個相對標準,不像DNA marker那樣絕對準確

q 【Trans 實驗常見問題和解答】蛋白質電泳 -- 蛋白質Marker缺帶

a 上麵缺帶為marker降解,寄回質檢;
下麵缺帶為小帶壓縮到一塊,凝膠製備或者緩衝液不新鮮;
膠濃度太低小條帶易被壓到一起,建議提高膠濃度 .

q 【Trans 實驗常見問題和解答】蛋白質電泳 -- 濃縮膠與分離膠斷裂、板間有氣泡對電泳有影響嗎?

a 這主要出現在初學者中,一般對電泳不會有太大的影響。前者主要原因是拔梳子用力不均勻或過猛所致;後者是由於在解除製膠的夾子後,板未壓緊而致空氣進入引起的。

q 【Trans 實驗常見問題和解答】蛋白質電泳 -- 為什麽電泳電壓很高而電流卻很低呢?

a 這種現象一般初學者易出現。比如電壓50V以上,可電流卻在5mA以下。主要是由於電泳槽沒有正確裝配,電流未形成通路。包括:a.內外槽裝反;b.外槽液過少;c.電泳槽底部的絕緣體未去掉(比如倒膠用的橡膠皮)。
處理辦法:電泳槽正確裝配即可。