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q 【RT-PCR常見問題解答】反轉錄反應溫度在42°C和50°C-55°C反應有何差別?

a 一般的反轉錄酶的適宜反應溫度是42°C,但是對於某些GC含量高的基因或二級結構複雜的基因,在42°C不足以打開二級結構,使cDNA合成無法順利進行,此時需要耐高溫的反轉錄酶,如TransScript® Ⅱ  RT,在高溫(50°C-55°C)條件下進行反轉錄以獲得較好的結果。

q 【RT-PCR常見問題解答】RNase H活性對反轉錄反應的影響?

a RNase H高活性能夠催化降解RNA/DNA雜交體中的RNA。RNase H低活性減少了第一鏈cDNA合成反應中RNA/DNA雜交體中模板RNA被降解,從而保證第一鏈cDNA的合成量和長度。